分享一篇發(fā)表在Angewandte Chemie International Edition上的文章，標題是“One-Step Enrichment and Quantitative Analysis of In Vivo Protein Complexes via Dimethylpiperidine Cross-Linker DPST”，通訊作者是來自中國科學(xué)院大連物理化學(xué)研究所的張麗華老師和趙群老師，主要研究興趣為蛋白質(zhì)組學(xué)研究。

體內(nèi)交聯(lián)質(zhì)譜（cross-linking mass spectrometry, XL-MS）和同位素標記定量蛋白質(zhì)譜都是研究者理解生命體的動態(tài)過程的強力工具。然而，現(xiàn)有的XL-MS方法在富集過程中存在顯著的樣品損失，且重現(xiàn)性較差（20%-40%），限制了其在有限樣品中的應(yīng)用和精確定量。因此，作者希望開發(fā)一種?內(nèi)源性、可一步富集且?物相容性的新型交聯(lián)劑。

作者首先設(shè)計并合成了?系列烷基鏈長度不同的可富集的2,6-?甲基哌啶?琥珀酰亞胺酯（DPSn）交聯(lián)劑，并使用牛血清白蛋白BSA作為模型蛋白驗證交聯(lián)劑的可行性，發(fā)現(xiàn)其中13碳鏈變體DPST的鑒定數(shù)目最多。并用神經(jīng)母細胞瘤細胞進行TMT抗體的免疫熒光染色驗證了DPST的膜滲透性。隨后作者將DPST與多步富集交聯(lián)法（BSP）和一步富集交聯(lián)法（TBDSPP）進行比較，發(fā)現(xiàn)DPST在低樣本量的實驗中仍能高效鑒定交聯(lián)肽段和蛋白質(zhì)。

接下來，作者使用DPST對??腦源性原代神經(jīng)元的交聯(lián)蛋白質(zhì)組進行了研究，并總共鑒定到7,279個交聯(lián)肽，對應(yīng)于20,536個交聯(lián)位點和1,949個交聯(lián)蛋?。作者將DPST交聯(lián)劑的?步富集優(yōu)勢與同位素標記技術(shù)相結(jié)合，設(shè)計并合成了?對同位素標記的交聯(lián)劑DPST-H/L，成功量化了在NaAsO刺激下，應(yīng)激顆粒形成過程中78對上調(diào)的PPIs，其中30種具有?可信度（p < 0.05），而在這30種PPI中，有63%之前已經(jīng)被報道過。

總之，作者開發(fā)的DPST作為一種新型交聯(lián)劑，可將一步富集與TMT高精度定量技術(shù)結(jié)合，顯著提升了蛋白質(zhì)相互作用研究的覆蓋范圍和精確性。其適用于小樣本和動態(tài)環(huán)境的特點，使DPST在生物醫(yī)學(xué)研究和藥物開發(fā)中具有廣泛的應(yīng)用潛力。

本文作者：ZCL

責任編輯：LZ

DOI：10.1002/anie.202506832

原文鏈接：https://doi.org/10.1002/anie.202506832