分享一篇發表在Anal. Chem.上的文章，題目為“Acrolein as an Alternative Broadly Reactive Activity-Based Probe for Activity-Based Protein Profiling of Cysteinome”，通訊作者是來自中國科學院大連化學物理研究所的秦洪強和葉明亮兩位老師，他們團隊的研究方向聚焦于蛋白質組學與翻譯后修飾。這篇文章中，作者報道了丙烯醛作為基于活性的半胱氨酸組分析的廣譜反應性探針。

基于活性的蛋白質組分析（ABPP）已經成為化學生物學中高通量功能分析的關鍵工具。然而廣泛使用的基于碘乙酰胺（IAM）的半胱氨酸ABPP探針通常無法標記SN2反應性低的半胱氨酸，同時也面臨探針尺寸過大或操作步驟繁瑣等問題。因此作者希望設計具有不同反應機制的互補探針，并考慮最小化探針尺寸并簡化工作流程。

于是作者首先考慮使用三種簡單的α,β-不飽和羰基化合物——丙烯酸（AA）、丙烯酰胺（AM）和丙烯醛（ACR），通過基于凝膠的競爭性ABPP評估其硫醇反應性。Western Blot結果表明ACR顯示出優于AA和AM的反應性。

隨后作者使用ACR對細胞裂解液進行標記并直接進行蛋白質組學分析，結果顯示ACR作為ABPP探針具有出色的質譜兼容性和廣泛的蛋白質組反應性。

接著作者開發了基于ACR標記的化學蛋白質組學平臺。在用胰蛋白酶消化ACR標記的蛋白質組后，使用固相酰肼微珠捕獲標記肽段，去除非特異性肽段后使用甲氧胺釋放捕獲肽段。經過優化，這一策略可以在8807種蛋白質上鑒定到28282個半胱氨酸位點，其中包含很多與碘乙酰胺-炔基（IAA）和碘乙酰胺-脫硫生物素（DBIA）探針鑒定的半胱氨酸組不同的位點。

總的來說，本篇文章開發了一種丙烯醛的探針，用于基于活性的半胱氨酸組分析。

本文作者：LCX

責任編輯：LZ

DOI：10.1021/acs.analchem.5c00022

原文鏈接：https://doi.org/10.1021/acs.analchem.5c00022